I ricercatori hanno sintetizzato e validato alcuni Acidi Nucleici Peptidici (PNA) in grado di colpire l’RNA messaggero (mRNA) codificante proteine fondamentali all’interno della cellula: CFTR, EZR e NHERF1. Hanno dimostrato, utilizzando modelli cellulari FC (cellule FC Calu-3), che alcuni PNA possono inibire specificatamente l’azione dei MicroRNA, una classe di piccole molecole di RNA che hanno un ruolo chiave nel controllo dell’espressione genica (cioè di quanto e come viene prodotta la proteina da essi controllata). Per mezzo di PNA inibenti questi MicroRNA si può aumentare l’mRNA di CFTR e quindi aumentare la quantità di sintesi della proteina stessa; lo stesso avviene per la proteina NHERF (una proteina che contribuisce a stabilizzare CFTR sulla membrana cellulare). In particolare, un PNA inibente il MicroRNA miR-335-5p aumenta il contenuto e la funzionalità di CFTR, con un’attività simile al correttore VX-809, in modelli cellulari FC con mutazione F508del (cellule murine FRT-YFP F508del CFTR). Tutti i PNA valutati si sono dimostrati non tossici. I PNA che agiscono su MicroRNA regolatori di CFTR e di proteine interagenti con CFTR possono essere considerati quindi potenziali modulatori del processo di recupero della proteina CFTR mutata, e dunque offrire nuovo supporto alle terapie del difetto di base FC.
Researchers synthesized PNAs targeting the 3’UTR of CFTR, EZR and NHERF1 mRNAs. They demonstrated that PNAs specific for miR-145-5p and miR-101-3p inhibit miR-145-5p and miR-101-3p biological activity and increase CFTR mRNA content (RT-qPCR) and CFTR protein production (Western blotting) by cystic fibrosis Calu-3 cells. They found that a PNA targeting miR-335-5p (specific for NHERF1 3’UTR sequence) inhibits miR-335-5p and induces NHERF1 production (Western blotting). At the same time, it is able to increase CFTR (Western blotting) and CFTR function in the FRT-YFP F508del CFTR cells. The potency of this effect was similar to VX809. All the employed PNAs were not toxic, did not induce inhibition of cell growth and activation of apoptosis. This pilot project gave evidence that PNA-based targeting of miRNAs regulating CFTR and players of the CFTR interactome could implement mutated CFTR rescue.
