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Risultato Progetto: FFC#3/2012
Studio del ruolo patogenetico e terapeutico del canale epiteliale del Na+ (ENaC) nella fibrosi cistica tipica e atipica

Study of the pathogenetic and therapeutic role of the Epithelial Na+ channel (ENaC) in CF and CF-like disease

Identificate mutazioni del gene ENaC probabilmente in grado di contribuire alla malattia FC. Dimostrata su modelli cellulari la possibilità di ridurre l'attività del canale ENaC mediante inibizione di peptidasi extracellulari o interventi "epigenetici" (rivolti all'attività del gene anziché al gene stesso).

Dati del Progetto

Responsabile
Marco Lucarelli (Dip. Biotecnologie cellulari ed Ematologia, Università La Sapienza, Roma)
Categoria/e
Partner
Cristina Bombieri (Dip. Scienze della Vita e della Riproduzione, Università di Verona), Massimo Conese (Dip. Scienze Biomediche, Università di Foggia)
Ricercatori coinvolti
20
Durata
2 anni
Finanziamento totale
85.000 €
Adozione raggiunta
85.000 €
Obiettivi
Nonostante l’elevato numero di variazioni di sequenza identificate nel gene CFTR, in vari pazienti con Fibrosi Cistica (FC) non...
Objectives
Despite the high number of CFTR gene sequence variants identified, several CF patients remain with unidentified mutations; moreover, the...
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Risultati

Per l’analisi mutazionale dei geni ENaC sono stati studiati 84 pazienti con FC tipica o atipica, con almeno 1 mutazione del CFTR non identificata. La frequenza cumulativa delle variazioni trovate è risultata essere 0,25, molto simile a quella di un precedente studio (0,30). Dopo l’analisi di frequenza e gli studi su computer, sono state selezionate 4 mutazioni (7 alleli) probabilmente causa di patologia: p.Pro37Leu (SCNN1A), p.Glu438Gly (SCNN1B), p.Ser82Cys (SCNN1B) e p.Glu197Lys (SCNN1G). I meccanismi di funzionamento di queste mutazioni sono stati studiati su cellule primarie FC e cellule FRT (Fisher Rat Thyroid). E’ risultato possibile ridurre il riassorbimento di fluido dipendente da ENaC mediante inibitori di peptidasi (enzimi) extracellulari o trattamenti “epigenetici”, che si realizzano con modalità solo in parte chiarite (inibizione della trascrizione o altro).

Results

All treatments resulted to be able to reduce channel activity. In case of epigenetic treatments in stable cell lines, the molecular basis for this reduction seems to be the transcription inhibition, whereas in primary cells a different mechanism, to be clarified, seems effective. For mutational analysis of ENaC genes, 84 patients with CFof CF-like diseases, with at least one unidentified CFTR mutation, were analyzed. The cumulative frequency of variations is in agreement with a previously published frequency of 0.30. After frequency and in silico analysis, 4 probably damaging ENaC mutations (7 alleles) were selected: p.Pro37Leu (SCNN1A), p.Glu438Gly (SCNN1B), p.Ser82Cys (SCNN1B) and p.Glu197Lys (SCNN1G). We have been using FRT cells expressing tagged human ENaC genes as cellular models for the study of functional effects of these 4 variations. As a lot of CF or CF-like patients resulted negative for ENaC gene mutations, to obtain more information about a possible involvement of other genes, a whole exome sequencing by a NGS technology is ongoing. These results add new insight into CF molecular mechanisms, partially extending the pathogenetic mechanism to ENaC molecular lesions.