Aldo Di Leonardo
Il progetto, prendendo in considerazione le mutazioni di stop, più rare della più diffusa F508del, ha l’obiettivo di sviluppare una nuova tecnica di editing genetico sito specifica. I ricercatori propongono lo sviluppo e utilizzo dell’editing sito-specifico dell’mRNA tramite la deaminazione dell’adenosina in inosina, ribonucleotide riconosciuto come guanosina dal ribosoma, che consentirebbe di correggere codoni stop nell’mRNA. Questa nuova tecnica di editing prevede l’utilizzo del sistema REPAIRv2 e di oligonucleotidi antisenso (ASOs) specifici per la regione dell’mRNA dove è presente il codone di stop. I ricercatori propongono di valutare l’efficacia della procedura su modelli cellulari con tecniche di biologia molecolare quali real time-PCR, western blotting, immunofluorescenza e sequenziamento.
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Taking into consideration stop mutations, rarer than the more common F508del, this research project aims to develop a new site-specific gene-editing technique. The researchers propose the development and use of site-specific mRNA editing through the deamination of Adenosine into Inosine, a ribonucleotide recognized as guanosine by the ribosome, which would allow the correction of stop codons in the mRNA. This new editing technique involves the use of the REPAIRv2 system and antisense oligonucleotides (ASOs) specific to the mRNA region where the stop codon is present. The researchers propose to evaluate the effectiveness of the procedure on cellular models with molecular biology techniques such as real time-PCR, western blotting, immunofluorescence and sequencing.
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