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Risultato Progetto: FFC#1/2017
SpliceFix: riparare difetti di splicing del gene CFTR tramite tecnologia CRISPR/Cas9

SpliceFix: fixing splicing defects in the CFTR gene through CRISPR/Cas9 technology

L’editing genomico come nuova strategia per il trattamento delle mutazioni splicing.

Dati del Progetto

Responsabile
Anna Cereseto (Centro per la Biologia Integrata - CIBIO, Università degli Studi di Trento)
Categoria/e
Partner
Zeger Debyser (Lab. for Molecular Virology & Gene Therapy, Center for Molecular Medicine, Faculty of Medicine, KU Leuven); Daniele Arosio (Istituto di Biofisica, CNR, Trento)
Ricercatori coinvolti
7
Durata
2 anni
Finanziamento totale
90.000 €
Adozione raggiunta
90.000 €
Obiettivi
L’editing genomico consiste nella modifica diretta del gene attraverso un sistema di recente identificazione composto da sequenze di DNA...
Objectives
Researchers intend to develop SpliceFix, a novel therapeutic approach based on latest technologies of “genome editing”. These techniques rely...

Risultati

Sono stati generati dei costrutti (minigeni) contenenti i difetti di splicing 3272-26A>G o 3849+10kbC>T. Le analisi condotte sui minigeni modello in cellule standard o in cellule epiteliali di vie respiratorie o in organoidi di pazienti FC hanno evidenziato che AsCas12a, combinato al gRNA selezionato, rappresenta un sistema efficiente per riparare i difetti di splicing. La strategia proposta per la correzione delle mutazioni di splicing 3272-26A>G o 3849+10kbC>T, basata sull’enzima AsCas12a, si è dimostrata efficace nel recupero della funzionalità di CFTR endogeno negli organoidi intestinali di paziente FC, considerati questi un valido modello preclinico ex vivo. I risultati ottenuti forniscono una base importante per lo sviluppo futuro di un approccio clinico innovativo di terapia genica per il trattamento dei difetti di splicing che causano fibrosi cistica.

Results

A minigene-constructs was generated to efficiently model the 3272-26A>G CFTRand 3849+10kbC>T splicing defects. The analyses performed with the minigene models, either transiently or stably transfected in HEK293 cells and Caco-2 cells, in primary airway cells and in patients derived organoids, revealed that the AsCas12a in combination with a selected guide RNA is a highly efficient and precise technique to repair the splicing defects. These results demonstrate that AsCas12a in combination with a single sgRNA efficiently rescues endogenous CFTR function in patient’s intestinal organoids, which are recognised as a highly valuable preclinical model to predict ex vivo any success of therapeutic treatment in human patients. These results provide an important milestone towards the development of a successful gene therapy clinical approach for the treatment of splicing defects in Cystic Fibrosis.


Congress abstracts

– Maule G, Ramalho A, Arosio D et al. “Genome editing strategies to restore altered splicing events in cystic fibrosis” 12th European CF Young Investigators’ Meeting (EYIM), Paris, Institute Pasteur, February 21-23, 2018 (best oral presentation)
– Maule G, Casini A, Montagna C et al. “Permanent repair of splicing defect in cystic fibrosis through AsCas12a genome editing” European Society of Gene and Cell Therapy (ESGCT) – Changing Modern Medicine: Stem Cells & Gene, Lousanne, Switzerland, October 16-19, 2018